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技術文章

Technical articles
小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)新手使用
時間₪·↟◕☁:2022-07-29 點選次數₪·↟◕☁:495

檢測範圍₪·↟◕☁:                                                      

2nmol/L - 85nmol/L

使用目的₪·↟◕☁:

本試劑盒用於測定小鼠血清▩✘,血漿及相關液體樣本中脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)含量↟◕。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)水平↟◕。用純化的小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)抗體包被微孔板▩✘,製成固相抗體▩✘,往包被單抗的微孔中依次加入脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)▩✘,再與HRP標記的脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)抗體結合▩✘,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物▩✘,經過*洗滌後底物TMB顯色↟◕。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色▩✘,並在酸的作用下轉化成最終的黃色↟◕。顏色的深淺和樣品中的脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)呈正相關↟◕。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)▩✘,透過標準曲線計算樣品中小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)濃度↟◕。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(160nmol/L

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求 

1.標本採集後儘早進行提取▩✘,提取按相關文獻進行▩✘,提取後應儘快進行實驗↟◕。若不能馬上進行試驗▩✘,可將標本放於-20℃儲存▩✘,但避免反覆凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品▩✘,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟◕。

操作步驟

1. 標準品的稀釋₪·↟◕☁:本試劑盒提供原倍標準品一支▩✘,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟◕。

80nmol/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40nmol/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20nmol/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10nmol/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5nmol/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

2. 加樣₪·↟◕☁:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑▩✘,其餘各步操作相同)▩↟、標準孔▩↟、待測樣品孔↟◕。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl▩✘,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl▩✘,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)↟◕。加樣將樣品加於酶標板孔底部▩✘,儘量不觸及孔壁▩✘,輕輕晃動混勻↟◕。

3. 溫育₪·↟◕☁:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘↟◕。   

4. 配液₪·↟◕☁:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5. 洗滌₪·↟◕☁:小心揭掉封板膜▩✘,棄去液體▩✘,甩幹▩✘,每孔加滿洗滌液▩✘,靜置30秒後棄去▩✘,如此重複5次▩✘,拍幹↟◕。

6. 加酶₪·↟◕☁:每孔加入酶標試劑50μl▩✘,空白孔除外↟◕。

7. 溫育₪·↟◕☁:操作同3↟◕。

8. 洗滌₪·↟◕☁:操作同5↟◕。

9. 顯色₪·↟◕☁:每孔先加入顯色劑A50μl▩✘,再加入顯色劑B50μl▩✘,輕輕震盪混勻▩✘,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止₪·↟◕☁:每孔加終止50μl▩✘,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟◕。

11. 測定₪·↟◕☁:以空白孔調零▩✘,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟◕。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行↟◕。

計算

  以標準物的濃度為橫座標▩✘,OD值為縱座標▩✘,在座標紙上繪出標準曲線▩✘,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程式▩✘,將樣品的OD值代入方程式▩✘,計算出樣品濃度▩✘,再乘以稀釋倍數▩✘,即為樣品的實際濃度↟◕。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用▩✘,酶標包被板開封后如未用完▩✘,板條應裝入密封袋中儲存↟◕。

2濃洗滌液可能會有結晶析出▩✘,稀釋時可在水浴中加溫助溶▩✘,洗滌時不影響結果↟◕。

3.各步加樣均應使用加樣器▩✘,並經常校對其準確性▩✘,以避免試驗誤差↟◕。一次加樣時間最好控制在5分鐘內▩✘,如標本數量多▩✘,推薦使用排槍加樣↟◕。

4. 請每次測定的同時做標準曲線▩✘,最好做復孔↟◕。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值)▩✘,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定▩✘,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)↟◕。

5. 封板膜只限一次性使用▩✘,以避免交叉汙染↟◕。

6.底物請避光儲存↟◕。

7.嚴格按照說明書的操作進行▩✘,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品▩✘,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理↟◕。

9.本試劑不同批號組分不得混用↟◕。

儲存條件及有效期

1試劑盒儲存₪·↟◕☁:2-8↟◕。

2.有效期₪·↟◕☁:6個月

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