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技術文章

Technical articles
人凝血因子Ⅷ(FⅧ)酶聯免疫分析
時間↟✘:2022-08-01 點選次數↟✘:261

本試劑盒僅供研究使用╃│₪│。

檢測範圍↟✘:                                                           

5 ng/ml -180 ng/ml

 

使用目的↟✘:

本試劑盒用於測定人血清│··✘•、血漿及相關液體樣本中凝血因子Ⅷ(F)含量╃│₪│。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本凝血因子Ⅷ(F)水平╃│₪│。用純化的凝血因子Ⅷ(F)抗體包被微孔板╃◕·▩╃,製成固相抗體╃◕·▩╃,往包被單抗的微孔中依次加入凝血因子Ⅷ(F)╃◕·▩╃,再與HRP標記的凝血因子Ⅷ(F)抗體結合╃◕·▩╃,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物╃◕·▩╃,經過*洗滌後底物TMB顯色╃│₪│。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色╃◕·▩╃,並在酸的作用下轉化成最終的黃色╃│₪│。顏色的深淺和樣品中的凝血因子Ⅷ(F)呈正相關╃│₪│。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)╃◕·▩╃,透過標準曲線計算樣品凝血因子Ⅷ(F)濃度╃│₪│。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(320 ng/ml

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求 

1.標本採集後儘早進行提取╃◕·▩╃,提取按相關文獻進行╃◕·▩╃,提取後應儘快進行實驗╃│₪│。若不能馬上進行試驗╃◕·▩╃,可將標本放於-20℃儲存╃◕·▩╃,但避免反覆凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品╃◕·▩╃,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃│₪│。

操作步驟

1. 標準品的稀釋↟✘:本試劑盒提供原倍標準品一支╃◕·▩╃,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃│₪│。

160ng/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

80ng/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

40ng/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

20ng/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

10ng/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

加樣↟✘:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑╃◕·▩╃,其餘各步操作相同)│··✘•、標準孔│··✘•、待測樣品孔╃│₪│。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl╃◕·▩╃,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl╃◕·▩╃,

1. 然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)╃│₪│。加樣將樣品加於酶標板孔底部╃◕·▩╃,儘量不觸及孔壁╃◕·▩╃,輕輕晃動混勻╃│₪│。

2. 溫育↟✘:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘╃│₪│。   

3. 配液↟✘:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

4. 洗滌↟✘:小心揭掉封板膜╃◕·▩╃,棄去液體╃◕·▩╃,甩幹╃◕·▩╃,每孔加滿洗滌液╃◕·▩╃,靜置30秒後棄去╃◕·▩╃,如此重複5次╃◕·▩╃,拍幹╃│₪│。

5. 加酶↟✘:每孔加入酶標試劑50μl╃◕·▩╃,空白孔除外╃│₪│。

6. 溫育↟✘:操作同3╃│₪│。

7. 洗滌↟✘:操作同5╃│₪│。

8. 顯色↟✘:每孔先加入顯色劑A50μl╃◕·▩╃,再加入顯色劑B50μl╃◕·▩╃,輕輕震盪混勻╃◕·▩╃,37℃避光顯色10分鐘.

9. 終止↟✘:每孔加終止50μl╃◕·▩╃,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃│₪│。

測定↟✘:以空白孔調零╃◕·▩╃,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃│₪│。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行

計算

  以標準物的濃度為橫座標╃◕·▩╃,OD值為縱座標╃◕·▩╃,在座標紙上繪出標準曲線╃◕·▩╃,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程式╃◕·▩╃,將樣品的OD值代入方程式╃◕·▩╃,計算出樣品濃度╃◕·▩╃,再乘以稀釋倍數╃◕·▩╃,即為樣品的實際濃度╃│₪│。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用╃◕·▩╃,酶標包被板開封后如未用完╃◕·▩╃,板條應裝入密封袋中儲存╃│₪│。

2濃洗滌液可能會有結晶析出╃◕·▩╃,稀釋時可在水浴中加溫助溶╃◕·▩╃,洗滌時不影響結果╃│₪│。

3.各步加樣均應使用加樣器╃◕·▩╃,並經常校對其準確性╃◕·▩╃,以避免試驗誤差╃│₪│。一次加樣時間最好控制在5分鐘內╃◕·▩╃,如標本數量多╃◕·▩╃,推薦使用排槍加樣╃│₪│。

4. 請每次測定的同時做標準曲線╃◕·▩╃,最好做復孔╃│₪│。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值)╃◕·▩╃,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定╃◕·▩╃,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)╃│₪│。

5. 封板膜只限一次性使用╃◕·▩╃,以避免交叉汙染╃│₪│。

6.底物請避光儲存╃│₪│。

7.嚴格按照說明書的操作進行╃◕·▩╃,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品╃◕·▩╃,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理╃│₪│。

9.本試劑不同批號組分不得混用╃│₪│。

儲存條件及有效期

1試劑盒儲存↟✘:2-8╃│₪│。

2.有效期↟✘:6個月

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